Разработка и валидация методики количественного определения силденафила и n-десметил силденафила с помощью ВЭЖХ-МС/МС в плазме крови человека

Aim. To assess bioequivalence of sildenafil citrate tablet formulation produced by pharmaceutical company “Microkhim” (Rubezhnoe, Ukraine) it was developed and validated a prompt, specific and quite simple method for quantitative determination of sildenafil and its active metabolite - N-desmethyl sildenafil concentrations in the human blood using deuterium labeled internal standards. Direct liquid-liquid extraction procedure was utilized to extract the analytes from the blood plasma.Methods. Contents of sildenafil and its metabolite in supernatant were determined by means of the high performance liquid chromatography / tandem mass spectrometric detection technique. Ionization of sildenafil, N-desmethyl sildenafil, sildenafil-d8 and N-desmethyl sildenafil-d8 was performed in the positive electrospray mode (ESI, Positive). Detection of the analytes was carried out in the multi reactions monitoring (MRM) regimen with the following m/z values for selected parent ions: 475,30; 483,20; 461,20 and 469,20, respectively. The daughter ion m/z value was selected to be 283,10 for all analytes.Results. Analytical method proposed proved to demonstrate reliable accuracy and reproducibility for both analytes and has been validated within linear range 5,05-1009,92 ng/ml for sildenafil and 2,24-400,84 ng/mL for N-desmethyl sildenafil with correlation coefficient (r2) equaled to 0.9975 and 0.9973, respectively.Conclusions. It was developed and validated a simple, specific and sensitive HPLC-MS/MS method for quantitative determination of sildenafil and its active metabolite N-desmethyl sildenafil concentrations in human blood plasma utilizing stable isotope labeled internal standards – deuterated sildenafil-d8 and N-desmethyl sildenafil- d8. Important feature of the method was a modified preanalytical procedures of biological samples preparation – direct liquid-liquid extraction that allowed to avoid laborious and time-consuming procedures such as evaporation to concentrate the samples with consequent recovery of dry residue, as well as to refuse from expensive solid-phase extraction. Application of the deuterium labeled internal standards allowed to suppress a biological matrix effect drastically, as well as to reach target LLOQ level. Experimental data obtained in the course of full validation of the method proposed that was performed in accordance with approved national and international technical and regulatory requirements, allowed to affirm high specificity, sensitivity, accuracy, reproducibility and efficiency of the method.Цель. Для изучения биоэквивалентности таблетированной формы силденафила (таблетки «Тегрум» 100 мг), производства ООО «НПФ «Микрохим» (г. Рубежное, Украина) был разработан и валидирован быстрый, простой и специфический метод количественного определения концентрации силденафила и его активного метаболита - N-десметил силденафила в плазме крови человека с применением внутренних стандартов, меченных атомами дейтерия. Извлечение аналитов из плазмы крови выполнялось методом прямой жидкость-жидкостной экстракции.Методы. Содержание силденафила и его десметилированного метаболита определяли в надосадочной жидкости методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием. Ионизацию cилденафила, N-десметил силденафила, cилденафила-d8 и N-десметил силденафила-d8 проводили электрораспылением в положительном режиме (ESI, Positive). При детектировании использовали мониторинг мультиреакций (MRM) выбранных материнских ионов с m/z 475,30; 483,20; 461,20; 469,20. Дочерний ион был выбран с m/z 283,10 для всех анализируемых соединений.Результаты. В ходе валидации данного метода в линейном диапазоне 5,05-1009,92 нг/мл для силденафила и 2,24-400,84 нг/мл для N-десметил силденафила коэффициент корреляции (r2) составил 0,9975 и 0,9973 соответственно, также была продемонстрирована надёжная правильность и воспроизводимость результатов для обеих аналитов.Выводы. Разработан и валидирован простой, специфический и чувствительный ВЭЖХ-МС/МС метод количественного определения концентрации силденафила и его активного метаболита N-десметил силденафила в плазме крови человека с применением меченных стабильными изотопами внутренних стандартов - силденафил-d8 и N-десметил силденафил- d8. Разработанный нами экспресс-метод подготовки биологических образцов, позволяет исключить влияние биологической матрицы на получаемые результаты и определять низкие концентрации обоих аналитов в надосадочной жидкости без применения таких трудоемких и времязатратных процедур, как концентрирование пробы, восстановление сухого остатка или дорогостоящей твердофазной экстракции. Экспериментальные данные, полученные в ходе полной валидации метода, соответствуют установленным национальным и международным требованиям, а так же подтверждают высокую специфичность, чувствительность, точность, воспроизводимость и экономичность разработанного нами метода

Разработка и валидация методики количественного определения силденафила и n-десметил силденафила с помощью ВЭЖХ-МС/МС в плазме крови человека

Aim. To assess bioequivalence of sildenafil citrate tablet formulation produced by pharmaceutical company “Microkhim” (Rubezhnoe, Ukraine) it was developed and validated a prompt, specific and quite simple method for quantitative determination of sildenafil and its active metabolite - N-desmethyl sildenafil concentrations in the human blood using deuterium labeled internal standards. Direct liquid-liquid extraction procedure was utilized to extract the analytes from the blood plasma.Methods. Contents of sildenafil and its metabolite in supernatant were determined by means of the high performance liquid chromatography / tandem mass spectrometric detection technique. Ionization of sildenafil, N-desmethyl sildenafil, sildenafil-d8 and N-desmethyl sildenafil-d8 was performed in the positive electrospray mode (ESI, Positive). Detection of the analytes was carried out in the multi reactions monitoring (MRM) regimen with the following m/z values for selected parent ions: 475,30; 483,20; 461,20 and 469,20, respectively. The daughter ion m/z value was selected to be 283,10 for all analytes.Results. Analytical method proposed proved to demonstrate reliable accuracy and reproducibility for both analytes and has been validated within linear range 5,05-1009,92 ng/ml for sildenafil and 2,24-400,84 ng/mL for N-desmethyl sildenafil with correlation coefficient (r2) equaled to 0.9975 and 0.9973, respectively.Conclusions. It was developed and validated a simple, specific and sensitive HPLC-MS/MS method for quantitative determination of sildenafil and its active metabolite N-desmethyl sildenafil concentrations in human blood plasma utilizing stable isotope labeled internal standards – deuterated sildenafil-d8 and N-desmethyl sildenafil- d8. Important feature of the method was a modified preanalytical procedures of biological samples preparation – direct liquid-liquid extraction that allowed to avoid laborious and time-consuming procedures such as evaporation to concentrate the samples with consequent recovery of dry residue, as well as to refuse from expensive solid-phase extraction. Application of the deuterium labeled internal standards allowed to suppress a biological matrix effect drastically, as well as to reach target LLOQ level. Experimental data obtained in the course of full validation of the method proposed that was performed in accordance with approved national and international technical and regulatory requirements, allowed to affirm high specificity, sensitivity, accuracy, reproducibility and efficiency of the method.Цель. Для изучения биоэквивалентности таблетированной формы силденафила (таблетки «Тегрум» 100 мг), производства ООО «НПФ «Микрохим» (г. Рубежное, Украина) был разработан и валидирован быстрый, простой и специфический метод количественного определения концентрации силденафила и его активного метаболита - N-десметил силденафила в плазме крови человека с применением внутренних стандартов, меченных атомами дейтерия. Извлечение аналитов из плазмы крови выполнялось методом прямой жидкость-жидкостной экстракции.Методы. Содержание силденафила и его десметилированного метаболита определяли в надосадочной жидкости методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием. Ионизацию cилденафила, N-десметил силденафила, cилденафила-d8 и N-десметил силденафила-d8 проводили электрораспылением в положительном режиме (ESI, Positive). При детектировании использовали мониторинг мультиреакций (MRM) выбранных материнских ионов с m/z 475,30; 483,20; 461,20; 469,20. Дочерний ион был выбран с m/z 283,10 для всех анализируемых соединений.Результаты. В ходе валидации данного метода в линейном диапазоне 5,05-1009,92 нг/мл для силденафила и 2,24-400,84 нг/мл для N-десметил силденафила коэффициент корреляции (r2) составил 0,9975 и 0,9973 соответственно, также была продемонстрирована надёжная правильность и воспроизводимость результатов для обеих аналитов.Выводы. Разработан и валидирован простой, специфический и чувствительный ВЭЖХ-МС/МС метод количественного определения концентрации силденафила и его активного метаболита N-десметил силденафила в плазме крови человека с применением меченных стабильными изотопами внутренних стандартов - силденафил-d8 и N-десметил силденафил- d8. Разработанный нами экспресс-метод подготовки биологических образцов, позволяет исключить влияние биологической матрицы на получаемые результаты и определять низкие концентрации обоих аналитов в надосадочной жидкости без применения таких трудоемких и времязатратных процедур, как концентрирование пробы, восстановление сухого остатка или дорогостоящей твердофазной экстракции. Экспериментальные данные, полученные в ходе полной валидации метода, соответствуют установленным национальным и международным требованиям, а так же подтверждают высокую специфичность, чувствительность, точность, воспроизводимость и экономичность разработанного нами метода

Characteristics of mucous-forming polysaccharides extracted from flax seeds

The research used the seeds of long flax of the "Vruchy" variety and oil-curly flax of the "Original" variety. To extract mucus, whole flax seeds were hydrated for 3 hours. in tap water, at a ratio of 1:20 and a temperature of 18 – 20 °C with constant stirring with a magnetic stirrer. This study aimed to evaluate the effect of temperature and duration of extraction on the yield of mucilaginous polysaccharides in aqueous solution from flaxseed. Change range: the temperature is selected in the range from 0 °С to 100 °С with a step of 20 °С; with a duration, ranging from 10 min to 140 min in 10 min increments. The yield of polysaccharides from flax seeds was determined for each combination of controlled factors. It was established that in the first 10 – 20 min. there is an increase in the yield of polysaccharides and the rate slows over time. For 90 min. equilibrium occurs at a temperature of 80 °C. This period of the process is optimal for the extraction of mucilage-forming polysaccharides from flaxseed. The mass of the extracted polysaccharides, from the mass of the seeds after a time of 95 min was 5.74%, and 6.00% at a temperature of 80 °С. A package of applied statistical programs was employed during the research to process the experimental data. A mathematical model of the process of extracting mucus-forming polysaccharides in an aqueous solution of flax seeds was built using regression analysis methods. The obtained regression equations determined the optimal regimes of the sought values in terms of temperature (80 – 85 °C), time (85 – 90 min) and conducted in compliance with the prescribed amount of water of 200 cm3. Within 10 – 20 min the formation of a transparent gel capsule around the flax with a phase separation boundary under seed contact with water, which does not change further. This indicates the completion of the hydration process

Report from the LHC Early Career Scientists Fora

Early Career Scientists (ECSs) are non-tenured researchers. ECSs constitute nearly half of every major collaboration at the LHC and contribute to all of scientific projects and activities. This report summarizes the programs of the ECSs committees of ALICE, ATLAS, CMS, and LHCb. An overview of the joint activities of the four committees that make up the LHC Early Career Scientists Fora is given. The impact of Covid-19 on the researchers' wellbeing is discussed in conjunction with a recent survey from LHCb

Порівняльний аналіз поведінки системи «кістка – фіксатор – ендопротез» після внутрішньої геміпельвектомії I–III типу та реконструкції з і без використання металевої балки

Objective: to study the changes of the biomechanical system «bone – fixator – endoprosthesis» under the loading for internal hemipelvectomy I–III type Enneking with reconstruction of the pelvic ring defect by a metalcement spacer with and without reinforcement with a metal bar.Methods: spatial geometry of the pelvis is reconstructed with the software package «Mimics». Data are obtained by calculating Mises values.Results: the stresses on the screws in the model were not significantly (0.27 %) larger (σmах 132.6 MPa vs. 132.3 MPa in the model without reinforcement) and did not exceed the strength limit. The maximum value of stress on polymethylmethacrylate in both models is localized in the place of contact with the pubic symphysis and is not significantly (0.4 %) higher in the model with the bar (σmах — 24.7 and 24.6 MPa, respectively). The maximum values of stress on the sacral bone in both models are defined in the zone of proximal screw installation in the lateral mass of the sacral bone, but 5 % larger in the construction without a bar — 10.6 and 10.1 MPa. The maximum permissible loads were: on the sacral bone in a model with a bar of 1.06 body weight, without a bar — 1.01; for polymethylmethacrylate — 3.05 and 3.03 body weight respectively; for metal screws — 3.44 and 3.43 body weight, respectively.Conclusions: the usage of a metal bar in the system «bone – fixator – endoprosthesis» for internal hemipellectomy type I–III does not change the mechanical strength and stability of the model. The most susceptible to destruction was the lateral area of the sacrum in the place of the proximal screw, which should be strengthened by inserting an additional screw into the upper part of the sacroiliac joint. In the dynamics (walking, running, climbing stairs), the load of the surgery site can be 4 times higher the weight of the body, which due to the linear growth of stress values can lead to the destruction of the structure and requires the usage of additional means of support (crutches, a stick, etc.).Цель: изучить поведение биомеханической системы «кость – фиксатор – эндопротез» под нагрузкой для внутренней гемипельвэктомии I–III типа по Еннекингу с реконструкцией дефекта тазового кольца металлопластмассовым спейсером с и без армирования металлической балкой.Методы: пространственная геометрия таза реконструирована с использованием программного пакета «Mimics». Данные получены путем расчета значений напряжения по Мизесу.Результаты: напряжение на винтах в модели без балки оказалось незначительно (0,27 %) больше (σmах 132,6 МПа против 132,3 МПа в модели без армирования) и не превышало предел прочности. Максимальное значение напряжения на полиметилметакрилате в обеих моделях локализовано в месте контакта с лобковым симфизом и незначительно (0,4 %) выше в модели с балкой (σmах — 24,7 и 24,6 МПа соответственно). Максимальные значения напряжения на крестцовой кости в обеих моделях обнаружены в области установления проксимального винта в боковую зону крестцовой кости, но на 5 % больше в конструкции без балки — 10,6 и 10,1 МПа. Максимально допустимые нагрузки составляли: на крестцовую кость в модели с балкой 1,06 массы тела, без балки — 1,01; для полиметилметакрилата — 3,05 и 3,03 массы тела соответственно; для металлических винтов — 3,44 и 3,43.Выводы: использование металлической балки в системе «кость – фиксатор – эндопротез» для внутренней гемипельвэктомии типа I–III не изменяет механическую прочность и стабильность модели. Наиболее подверженной разрушению оказалась боковая зона крестцовой кости в месте установки проксимального винта, которую следует укрепить путем введения дополнительного винта в верхнюю часть крестцово-подвздошного сустава. В динамике (ходьба, бег, подъем по лестнице) нагрузка прооперированного участка может в 4 раза превышать вес тела, что из-за линейного роста значений напряжений может вызвать разрушение конструкции и требует применения дополнительных средств опоры (костыли, трость и т. д.).Мета: вивчити поведінку біомеханічної системи «кістка – фіксатор – ендопротез» під навантаженням для внутрішньої геміпельвектомії I–III типу за Еннекінгом із реконструкцією дефекту тазового кільця металопластмасовим спейсером з і без армування металевою балкою.Методи: просторову геометрію таза реконструйовано з використанням програмного пакета «Mimics». Дані отримані шляхом розрахунку значень напруження за Мізесом.Результати: напруження на гвинтах у моделі без балки виявилися не значно (0,27 %) більшими (σmах 132,6 МПа проти 132,3 МПа у моделі без армування) і не перевищували межу міцності. Максимальне значення напруження на поліметилметакрилаті в обох моделях локалізовано в місці контакту з лобковим симфізом і не значно (0,4 %) вище в моделі з балкою (σmах — 24,7 і 24,6 МПа відповідно). Максимальні значення напруження на крижовій кістці в обох моделях визначено в ділянці встановлення проксимального гвинта в бокову зону крижової кістки, але на 5 % більші в конструкції без балки — 10,6 і 10,1 МПа. Максимально допустимі навантаження становили: на крижову кістку в моделі з балкою 1,06 маси тіла, без балки — 1,01; для поліметилметакрилату — 3,05 і 3,03 ваги тіла відповідно; для металевих гвинтів — 3,44 і 3,43.Висновки: використання металевої балки в системі «кістка – фіксатор – ендопротез» для внутрішньої геміпельвектомії типу I–III не змінює механічну міцність і стабільність моделі. Найбільш схильною до руйнування виявилася бокова зона крижової кістки в місці встановлення проксимального гвинта, яку слід зміцнити шляхом введення додаткового гвинта у верхню частину крижово-клубового суглоба. У динаміці (ходьба, біг, підйом сходами) навантаження прооперованої ділянки може в 4 рази перевищувати вагу тіла, що через лінійне зростання значень напружень може спричинювати руйнацію конструкції та вимагає застосування додаткових засобів опори (милиці, палиця тощо)